抗體依賴性細胞吞噬作用

抗體依賴性細胞吞噬作用 (ADCP) 是一種免疫消除機制，其憑借單克隆抗體 (mAb) 靶向腫瘤細胞，以促進吞噬免疫細胞將腫瘤細胞從體內(nèi)清除。這使得腫瘤細胞特異性 mAb 成為一種有吸引力的抗癌治療的候選藥物，并且?guī)追N療法已經(jīng)獲得批準（例如曲妥珠單抗，它是治療 Her-2 陽性乳腺癌的常用藥物）。

這些療法的作用機制 (MoA) 既依賴于它們結(jié)合巨噬細胞或單核細胞上的 Fc 受體 (FcR) 的能力，也依賴于它們與腫瘤細胞上過表達的抗原的特異性結(jié)合。在抗體開發(fā)過程中，通過體外分析表征分子誘導(dǎo)各種 MoA（包括 ADCP）的能力至關(guān)重要，以指示其治療潛力。測定 ADCP 的傳統(tǒng)技術(shù)通常：

使用采集通量較低的儀器，需要大體積的樣品（例如，傳統(tǒng)流式細胞儀）
費力費時，需要優(yōu)化方案、固定和反復(fù)洗滌等步驟
僅提供定性讀數(shù)或需要手動進行數(shù)據(jù)分析
測量誤差較多，而非定量真實的 ADCP 信號
依賴表達基因工程報告基因的細胞系

iQue^? 的 ADCP 利用 iQue^? 人抗體依賴性細胞吞噬作用試劑盒，通過精簡的工作流程對活靶細胞與 CD14+ 原代效應(yīng)細胞的共定位進行定量，實現(xiàn) ADCP 的高通量測定。利用 iQue^? 高通量流式細胞儀的強大功能與自動化集成分析，獲得靶向測試抗體對 ADCP 影響的瞬時藥理學(xué)數(shù)據(jù)。

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概念

圖 1. iQue^? 人抗體依賴性細胞吞噬作用試劑盒分析原理示意圖。

在 96 孔板或 384 孔板中，將 iQue^? 增殖和編碼（B/綠色）染料標(biāo)記的靶細胞與測試抗體共孵育，然后加入未標(biāo)記的效應(yīng)細胞（PBMC 或富集的單核細胞或巨噬細胞群）。

使用 iQue^? 細胞膜完整性（R/紅色）染料分離活細胞與死細胞。將根據(jù)靶細胞編碼器呈陽性的活的 CD14+ 效應(yīng)細胞的百分比對 ADCP 進行定量。

該試劑盒中使用的熒光團組合意味著它與 iQue^? BR 和 VBR 配置兼容。

獲得定量數(shù)據(jù)

生成適用于藥理學(xué)分析的可重現(xiàn)、特異性的 ADCP 測定值。

圖 2.使用 ForeCyte^? 進行高效數(shù)據(jù)分析，可自動計算 EC₅₀，獲得藥物效價排序

將 B/Green 標(biāo)記的 Ramos 細胞（2500 個細胞/孔）與 PBMC（效應(yīng)細胞/靶細胞比為 20:1）一起接種到 96 孔板中。用一系列不同的利妥昔單抗 mAb 亞型刺激 ADCP，這些亞型包括：IgG1、IgG1NQ（非糖基化）、IgG2 和 IgG4。使用 iQue^? 抗體依賴性細胞吞噬作用試劑盒標(biāo)記細胞，并使用 iQue^? 3 對 ADCP 進行分析。ADCP (%) 是指活細胞群中 CD14 和 B/Green 編碼 + 細胞的百分比。

1.Invivogen：用于細胞生物學(xué)研究的試劑和工具。

實現(xiàn)高通量分析

在 96 孔或 384 孔板中使用經(jīng)驗證的試劑快速定量 ADCP，促進您的發(fā)現(xiàn)。

圖 3.在單個 384 孔板中，分析在多種效應(yīng)細胞/靶細胞比條件下來自多例供體的 PBMC 的 ADCP 效應(yīng)。

將非貼壁的 Ramos 靶細胞（2500 個細胞/孔）與 Truxima (CD20-IgG1) 和 PBMC 以 5:1、10:1 和 20:1 的效應(yīng)細胞/靶細胞比共孵育。利用不含抗體的孔作為陰性對照。使用 iQue^? 人抗體依賴性細胞吞噬作用試劑盒和 iQue^? 3 對 ADCP 進行評估。

(A) 為 ADCP (%) 熱圖；(B) 和 (C) 分別為來自供體 1 和 2 的 PBMC 的 ADCP (%) 濃度響應(yīng)曲線。

分析生理相關(guān)的細胞模型

利用原代效應(yīng)細胞對各種貼壁或非貼壁靶細胞的 ADCP 進行評估。

圖 4.使用靈活的共培養(yǎng)模型區(qū)分治療藥物對貼壁靶細胞的吞噬作用。

將 B/Green 編碼的貼壁 AU565 細胞（10000 個細胞/孔）與曲妥珠單抗 (Her2-IgG1 mAb) 和分離的單核細胞（效應(yīng)細胞/靶細胞比為 5:1）共孵育。使用 iQue^? 人抗體依賴性細胞吞噬作用試劑盒標(biāo)記細胞，并使用 iQue^? 3 進行分析。

(A) ForeCyte^? 直方圖的樣品板視圖，顯示了 ADCP 事件（CD14+ B/Green+ 活細胞）隨曲妥珠單抗?jié)舛鹊脑黾佣黾印?/p>

(B) 與對照抗體 (BGal-IgG1) 相比，曲妥珠單抗處理后 ADCP (%) 增加。

最大程度地提高分析效率

通過實時數(shù)據(jù)分析和新穎的可視化工具，縮短獲得結(jié)果的時間

圖 5a.利用 iQue^? 采集樣品時，將自動填充預(yù)設(shè)的圈門模板。

將 iQue^? 人抗體依賴性細胞吞噬作用試劑盒隨附的模板導(dǎo)入 iQue^? ForeCyte^?，以提供與 CD14+ 單核細胞共定位的 B/綠色編碼靶細胞的即時定量結(jié)果。與簡單的 3 步圈門策略結(jié)合的單個細胞門，可確保測定真實的 ADCP 信號。

圖 5b.利用 iQue^? ForeCyte^? 軟件進行自動化數(shù)據(jù)分析，可提供即時的 ADCP 讀數(shù)。

應(yīng)用圈門模板后，可使用簡便易用的 iQue^? ForeCyte^? 分析平臺進行藥理學(xué)分析，同時以簡單、清晰的格式顯示結(jié)果。數(shù)據(jù)可視化的示例包括：

(A) 輪廓線圖，包含 CD14 陽性細胞群的清晰圈門；(B) 包含 Ramos 或 Raji 靶細胞的 PBMC 對 Truxima 的 ADCP (%) 響應(yīng)熱圖；(C) 來自 (B) 的數(shù)據(jù)，以濃度響應(yīng)曲線表示。對于 Ramos 和 Raji，從 iQue^? ForeCyte^? 直接導(dǎo)出的 EC50 值分別為 29.1 ng/mL 和 24.8 ng/mL。