使用高通量流式細(xì)胞儀分析自然殺傷細(xì)胞的活性
自然殺傷 (NK) 細(xì)胞是先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在免疫監(jiān)視和抗腫瘤免疫應(yīng)答中起著重要的作用。目前，已有多種類型的 NK 細(xì)胞相關(guān)癌癥免疫療法正在開發(fā)。腫瘤特異性抗體（包括 mAb、BiKES 和 TRiKES）能夠誘導(dǎo) NK 細(xì)胞介導(dǎo)的抗體依賴性細(xì)胞毒作用 (ADCC)，該作用已經(jīng)證實(shí)可成功對抗多種類型的癌癥，而在 CAR-NK 細(xì)胞生產(chǎn)方面的進(jìn)展則可實(shí)現(xiàn)特異性更強(qiáng)和效力更高的腫瘤細(xì)胞殺傷。評估 NK 細(xì)胞介導(dǎo)新療法的關(guān)鍵過程之一是定量分析 NK 細(xì)胞活化和腫瘤殺傷能力，以深入洞察潛在的療效。測定 NK 細(xì)胞介導(dǎo)殺傷和活化的傳統(tǒng)技術(shù)通常：
- 使用耗費(fèi)人力的間接細(xì)胞毒性測定方法，例如鉻釋放實(shí)驗(yàn)
- 無法同時(shí)定量分析細(xì)胞毒性、活化狀態(tài)和細(xì)胞因子/蛋白釋放
- 需要采用多個(gè)工作流程，每個(gè)工作流程都需要不同的儀器
- 無法結(jié)合生理相關(guān)的環(huán)境條件
iQue? NK 細(xì)胞殺傷分析應(yīng)用，可利用 iQue? 人 NK 細(xì)胞殺傷分析試劑盒對靶細(xì)胞殺傷、NK 細(xì)胞表型和活化標(biāo)志物的表達(dá)進(jìn)行同步、高通量的分析，以及對效應(yīng)蛋白和細(xì)胞因子的分泌進(jìn)行定量。iQue? ForeCyt? 可結(jié)合 iQue? 高通量流式細(xì)胞儀的強(qiáng)大功能，在單次分析中集成軟件分析、表型和功能讀數(shù)，為開發(fā)腫瘤免疫學(xué)和 NK 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞療法提供了簡化的解決方案。
應(yīng)用
檢測原理
現(xiàn)在，研究人員可以在單孔中測定表型和功能，提高了分析效率，同時(shí)還能洞察 NK 細(xì)胞殺傷分析的重要結(jié)果。
- 使用多重方法在單孔中測定 NK 細(xì)胞是活化狀態(tài)和靶細(xì)胞殺傷效應(yīng)。
圖 1.iQue? 人 NK 細(xì)胞殺傷分析試劑盒的分析原理圖解。使用熒光編碼染料染色，區(qū)分靶細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞，然后通過熒光細(xì)胞膜完整性染料進(jìn)行染色，檢測腫瘤細(xì)胞殺傷效果。使用 CD3、CD56 和 CD16 識別 NK 細(xì)胞，使用 CD69 和 CD25 評估細(xì)胞的活化狀態(tài)。在同一孔中，使用 2-plex iQue? Qbeads?，通過夾心法免疫分析對促炎細(xì)胞因子干擾素 γ (IFNg) 和促凋亡絲氨酸蛋白酶 - 顆粒酶 B 的產(chǎn)生進(jìn)行定量分析，還可以使用人 NK 細(xì)胞配套試劑盒分析其他細(xì)胞因子。
關(guān)鍵優(yōu)勢
洞察更多生物學(xué)結(jié)果
支持在生理相關(guān)模型中研究 NK 細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞殺傷作用。
圖 2.在共培養(yǎng)分析中定量自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的抗體依賴性細(xì)胞毒性、細(xì)胞因子/蛋白釋放和標(biāo)志物表達(dá)。編碼的 Raji 腫瘤細(xì)胞（2 × 104 個(gè)/孔）與來自兩個(gè)單獨(dú)供體的 PBMCs（2 × 105 個(gè)/孔）共培養(yǎng)。PBMCs 分別與以下三個(gè)抗 CD20 抗體之一共同孵育：Ab-1 (IgG1)、Ab-2 (IgG1) 或陰性對照 Ab-3 (IgA2)。濃度范圍在 10 μg/mL - 0.128 ng/mL 之間。
4 小時(shí)后，使用人 NK 細(xì)胞殺傷分析試劑盒和 iQue? 3 分析 10 μL 樣品，以評估腫瘤細(xì)胞殺傷情況，同時(shí)還使用 iQue? 人 NK 細(xì)胞配套試劑盒測定了顆粒酶 A。
(A,B) 來自兩個(gè)供體的靶細(xì)胞殺傷對抗體的響應(yīng)不同。(C,D) 兩個(gè)供體細(xì)胞顆粒酶 A 的產(chǎn)生都呈現(xiàn)出濃度和供體依賴性。(E,F) 自然殺傷細(xì)胞的 CD16+ 表達(dá)隨著刺激的增加而降低。
圖 3.通過細(xì)胞因子刺激的 NK 介導(dǎo)的直接腫瘤細(xì)胞殺傷也可以進(jìn)行定量。將編碼的 K562 腫瘤細(xì)胞（2×104 個(gè)/孔）與富集的（陰性選擇）人 NK 細(xì)胞共培養(yǎng)，人 NK 細(xì)胞已在單獨(dú)培養(yǎng)基（非活化 NK 細(xì)胞），或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15（已活化 NK 細(xì)胞）的培養(yǎng)基中孵育 16-18 小時(shí)，效靶比為 5:1。 在 4 小時(shí)和 24 小時(shí)后，使用 iQue? 人 NK 細(xì)胞殺傷分析試劑盒和 iQue? 3 對 10 μL 樣品進(jìn)行分析，以評估腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。
(A) 直方圖顯示了靶細(xì)胞在與非活化或細(xì)胞因子激活的 NK 細(xì)胞共培養(yǎng) 4 小時(shí)后的活性。(B,C) 圖中匯總了在與非活化或細(xì)胞因子激活的 NK 細(xì)胞共培養(yǎng) (B) 4 小時(shí)或 (C) 24 小時(shí)后死亡腫瘤細(xì)胞的百分比。
提高分析效率
在細(xì)胞和微球混合分析中同時(shí)測定效應(yīng)細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)和分泌效應(yīng)蛋白的含量。
圖 4.使用細(xì)胞表型分析和細(xì)胞因子分泌分析檢測 NK 活化的不同狀態(tài)。將編碼的 K562 腫瘤細(xì)胞（2×104 個(gè)/孔）與富集的（陰性選擇）人 NK 細(xì)胞共培養(yǎng)，人 NK 細(xì)胞已在單獨(dú)培養(yǎng)基（非活化 NK 細(xì)胞），或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15（已活化 NK 細(xì)胞）的培養(yǎng)基中孵育 16-18 小時(shí)，效靶比為 1:1 或 5:1。在共培養(yǎng) 24 小時(shí)后，取出 10 μL 樣品，使用 iQue? 人 NK 細(xì)胞殺傷分析試劑盒和 iQue? 3 進(jìn)行分析。
(A) 活化標(biāo)志物（CD69 和 CD25）的表達(dá)情況。(B) IFNg 的產(chǎn)生和顆粒酶 B 的分泌情況。 (C) 將 iQue? 人 NK 細(xì)胞配套試劑盒和 iQue? 人 NK 細(xì)胞殺傷分析試劑盒相結(jié)合，對其他額外的細(xì)胞因子進(jìn)行平行評估。 NK = 自然殺傷細(xì)胞。T = K562 腫瘤靶細(xì)胞。
IL-2 和 IL-15 活化后，多種效應(yīng)蛋白（如顆粒酶 B 和 CCL5 (RANTES)）的表達(dá)和分泌增加。這些作用在靶細(xì)胞和 NK 細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)進(jìn)一步增強(qiáng)。
簡化數(shù)據(jù)采集過程
實(shí)時(shí)的數(shù)據(jù)分析和創(chuàng)新的可視化工具可實(shí)現(xiàn)快速的數(shù)據(jù)采集。
圖 5.iQue? ForeCyt? 上的預(yù)先設(shè)門和多種分析功能可實(shí)現(xiàn)人 NK 細(xì)胞的自動(dòng)表型分析。
(A) 使用陽性和陰性孔在未活化的 NK 細(xì)胞（陰性；紅色）vs. 細(xì)胞因子活化的 NK 細(xì)胞（陽性；綠色）上創(chuàng)建 CD69 表達(dá)的疊加圖示例。(B) 顯示每個(gè)孔中 CD69+ 細(xì)胞百分比的微孔板熱圖示例。(C) 描述 NK 細(xì)胞上 CD69 表達(dá)的疊加直方圖示例。 （Non-act.NK = 未活化的 NK 細(xì)胞，Act.NK = 細(xì)胞因子活化的 NK 細(xì)胞，T = 靶標(biāo)癌細(xì)胞）。
節(jié)省時(shí)間和寶貴的樣本
將傳統(tǒng)工作流程壓縮并簡化為微量化取樣的單個(gè)小型化多重分析。
圖 6. 使用清晰易懂的方案，分析 NK 細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞殺傷作用，同時(shí)使用 iQue? 人 NK 細(xì)胞殺傷分析試劑盒評估 NK 細(xì)胞的活化狀態(tài)和細(xì)胞因子的釋放。
訂購信息
iQue? 人 NK 細(xì)胞殺傷分析試劑盒
平臺 | 兼容 iQue? 3/iQue? Screener Plus VBR 配置 |
|---|---|
現(xiàn)有規(guī)格 | 產(chǎn)品目錄號 |
1 × 96 孔 | 97082 |
5 × 96 孔 | 97083 |
1 × 384 孔 | 97084 |
5 × 384 孔 | 97085 |
iQue? 人 NK 細(xì)胞配套試劑盒
產(chǎn)品目錄號 | 說明 |
|---|---|
97089 | iQue? Human MIP 1α NK 細(xì)胞配套試劑盒 |
97090 | iQue? 人 RANTES NK 細(xì)胞配套試劑盒 |
97091 | iQue? 人 GM-CSF NK 細(xì)胞配套試劑盒 |
97092 | iQue? 人 CD178/Fas 配體 NK 細(xì)胞配套試劑盒 |
97093 | iQue? 人顆粒酶 A NK 細(xì)胞配套試劑盒 |
97094 | iQue? 人 TNFα NK 細(xì)胞配套試劑盒 |
