T 細(xì)胞耗竭
T 細(xì)胞耗竭是一個(gè)概念寬泛的術(shù)語，用于描述長期刺激造成的 T 細(xì)胞功能障礙。耗竭性t細(xì)胞可表現(xiàn)出獨(dú)特的表型，包括抑制性標(biāo)志物（例如 PD-1、LAG-3 和 TIM-3）過度表達(dá)，以及 T 細(xì)胞釋放促炎性細(xì)胞因子（IFNγ 和 TNFα）的能力減弱。t細(xì)胞耗竭通常發(fā)生在腫瘤微環(huán)境中，耗竭 t 細(xì)胞將喪失細(xì)胞毒性作用，無法殺傷癌細(xì)胞。
如何逆轉(zhuǎn)或克服 T 細(xì)胞的耗竭狀態(tài)問題一直備受關(guān)注，特別是通過加入檢查點(diǎn)抑制抗體來產(chǎn)生 CAR-T 細(xì)胞這一研究。因此，模擬 t細(xì)胞耗竭從問題到解決方案的環(huán)境能夠幫助我們進(jìn)一步了解這一現(xiàn)象。
檢測原理
在單個(gè)孔中，通過多重方法評估 T 細(xì)胞耗竭、增殖和細(xì)胞因子釋放。
圖 1. iQue? 人 T 細(xì)胞耗竭分析試劑盒的分析原理示意圖。T 細(xì)胞表型分析主要通過檢測 3 個(gè)耗竭標(biāo)志物的表達(dá)：PD-1（早期）、LAG-3（中期）和 TIM-3（晚期）。還可以使用 2-plex Qbeads，通過夾心法免疫分析，在同一孔中定量分析 2 種效應(yīng)細(xì)胞因子（IFNg 和 TNFα）。您也可以選擇同時(shí)測定 T 細(xì)胞增殖或編碼的靶細(xì)胞（本示意圖中未包含此分析）。
關(guān)鍵優(yōu)勢
同時(shí)進(jìn)行表面蛋白和細(xì)胞因子表達(dá)的定量測定
圖 2.耗竭的 T 細(xì)胞將過表達(dá)抑制性受體，并產(chǎn)生低濃度的效應(yīng)細(xì)胞因子 TNFα
將未耗竭（即先前未刺激）或耗竭前的 CD3+ T 細(xì)胞以 200 K/孔的密度接種。耗竭的 T 細(xì)胞在接種前用 Dynabead CD3/CD28（微球:細(xì)胞比例 1:1）刺激，然后每隔 2-3 天再次刺激（總共刺激 5 次）。在孔中使用不同密度的 Dynabead CD3/CD28 誘導(dǎo)活化。對照孔中不使用 Dynabead。在 24 h 時(shí)，在 iQue? 3 上使用 iQue? 人 T 細(xì)胞耗竭分析試劑盒分析 10 μL 樣本。
在生理相關(guān)的模型中洞察 T 細(xì)胞活化狀態(tài)的更多生物學(xué)信息
圖 3. LAG-3 過表達(dá)在耗竭 T 細(xì)胞上持續(xù) 3 天以上
將未耗竭（即先前未刺激）或耗竭前的 CD3+ T 細(xì)胞以 200 K/孔的密度接種。耗竭的 T 細(xì)胞用 Dynabead CD3/CD28（微球:細(xì)胞比例 1:1）進(jìn)行反復(fù)刺激（每隔 2-3 天次刺激一次，總共刺激 5 次）。在孔中使用 Dynabead CD3/CD28 誘導(dǎo)活化。每 24 h 使用 iQue? 人 T 細(xì)胞耗竭分析試劑盒分析 10 μL 樣本。
易于使用和解析；可使用預(yù)先設(shè)門策略
圖 4.采用 iQue? ForeCyt? 上的預(yù)定義設(shè)門進(jìn)行耗竭 T 細(xì)胞亞群的自動(dòng)表型分析
最大程度減少樣本操作：小體積，單次清洗，無需稀釋
- 簡單的實(shí)驗(yàn)方案，將細(xì)胞和上清液作為一個(gè)樣本，從而簡化了工作流程。
- 無需標(biāo)記或進(jìn)行額外的優(yōu)化步驟。
圖 5a. 使用清晰易懂的方案，通過 iQue? 人 T 細(xì)胞耗竭分析試劑盒進(jìn)行 T 細(xì)胞表型和細(xì)胞因子釋放分析。
圖 5b. 清晰易懂的改進(jìn)方案，分析中允許包含靶細(xì)胞?？赏ㄟ^ iQue? 人 T 細(xì)胞耗竭分析試劑盒進(jìn)行 T 細(xì)胞表型和細(xì)胞因子釋放分析。
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