通過可重現(xiàn)、清晰易懂的方案評價(jià) T 細(xì)胞對實(shí)體瘤的應(yīng)答，以溫和的方式分離腫瘤球

圖 1b. ?檢測工作流程—使用 iQue^? 分析 T 細(xì)胞的腫瘤球殺傷檢測方案。

利用先進(jìn)的 3D 細(xì)胞模型在腫瘤細(xì)胞殺傷過程中分析 T 細(xì)胞表型和功能

圖 2a.使用 iQue^? 高通量流式細(xì)胞儀定量檢測腫瘤球 T 細(xì)胞殺傷過程中的細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子釋放
將使用 Incucyte^? Nuclight 標(biāo)記為綠色的 MDA-MB-231 細(xì)胞（2,500/孔）接種到含有 2.5% Matrigel^? 的 ULA 板中，孵育 72 小時(shí)，促進(jìn)腫瘤球形成。以 5:1 的效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞比 (E:T) 加入未標(biāo)記的 PBMC，并使用 ImmunoCult? 人 CD3/CD28/CD2 T 細(xì)胞活化因子對其誘導(dǎo)活化。在第 1 天、第 3 天和第 7 天，對接種相同細(xì)胞的孔板進(jìn)行分離，并使用 iQue^? 人 T 細(xì)胞殺傷分析試劑盒分析 T 細(xì)胞表型。(A) 在 Immunocult 最高濃度下，從第 1 天到第 7 天，靶細(xì)胞活力逐漸下降。(B) 從第 1 天到第 3 天，T 細(xì)胞活化標(biāo)志物和 (C) 耗竭標(biāo)志物表達(dá)升高，然后在第 7 天開始下降。(D) 釋放的顆粒酶 B（一種直接參與誘導(dǎo) T 細(xì)胞介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡的蛋白酶）隨著 Immunocult 濃度的升高而增加。

圖 2b.采集少量上清液樣品研究 T 細(xì)胞功能隨時(shí)間的變化和進(jìn)行細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)分析
在BT474（2,500/孔）腫瘤球形成 72 小時(shí)后，添加 PBMC（12,500/孔）和 CD3/CD28 Dynabead。在第 1 天、第 4 天和第 8 天采集上清液樣品 (10 μL)，并使用 iQue^? Qbeads^? 分析細(xì)胞因子濃度。提示 T 細(xì)胞活化的細(xì)胞因子（IFNγ 和 TNFα）的濃度隨著時(shí)間以及 Dynabead 密度的增加而升高。 此外，顆粒酶 B（直接參與細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞的蛋白酶）的釋放也有所增加。IL-10（一種與記憶 T 細(xì)胞形成頻率有關(guān)的細(xì)胞因子）的產(chǎn)生量持續(xù)增加至第 4 天，然后在第 8 天開始減少。

快速采樣從而增加復(fù)制，可實(shí)現(xiàn)多試劑盒分析以及高通量定量檢測

圖 3.分析用時(shí)短，可以使用多個(gè) T 細(xì)胞表征檢測試劑盒更好地進(jìn)行廣泛的表型分析
在使用 Incucyte^? Nuclight 標(biāo)記為綠色的 BT474（2,500/孔）腫瘤球形成 72 小時(shí)后，添加 PBMC（12,500/孔）和 CD3/CD28 Dynabead。在第 1 天、第 4 天和第 8 天，使用 iQue^? 人 T 細(xì)胞活化、殺傷和耗竭分析試劑盒分析來自復(fù)制孔板的細(xì)胞。(A) CD3+ 活細(xì)胞群中 CD25+ 細(xì)胞的孔板視圖。(B) 靶細(xì)胞活力隨著時(shí)間的推移而降低。(C) 早期活化標(biāo)志物 CD69 的表達(dá)在第 1 天增加，然后在第 4 天減少。(D) 后期活化標(biāo)志物 CD25 的表達(dá)在第 4 天和第 8 天增加。(E) PD-1（T 細(xì)胞耗竭的早期指標(biāo)）的表達(dá)在第 4 天最高。

快速采樣從而增加復(fù)制，可實(shí)現(xiàn)多試劑盒分析以及高通量定量檢測

圖 4.使用iQue^? Forecyt^? 中預(yù)先設(shè)定的設(shè)門模板，實(shí)現(xiàn) T 細(xì)胞亞群自動(dòng)分型將 BT474 腫瘤球（2,500/孔）與 PBMC（效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞比 (E:T) 為 5:1）共孵育，然后使用 CD3/CD28 Dynabead 誘導(dǎo)活化。在第 24 小時(shí)，使用 iQue^? 人 T 細(xì)胞記憶分析試劑盒進(jìn)行分析。(A) 使用試劑盒中的模板對 Tscm（干細(xì)胞記憶 T 細(xì)胞）和 Tte（末端效應(yīng) T 細(xì)胞）設(shè)門的圖。在直接從 iQue^? Forecyt^? 軟件導(dǎo)出的 (B) 熱圖和 (C) 濃度響應(yīng)曲線中，明顯可以看出隨著 Dynabead 濃度的增加從早期 Tscm（干細(xì)胞記憶 T 細(xì)胞）表型到后期 Tte（末端效應(yīng) T 細(xì)胞）表型的變化。這種變化還伴隨著 T 細(xì)胞自我更新能力喪失。