使用 Incucyte^? Fabfluor-pH 抗體標(biāo)記試劑和自動(dòng)化分析工具可輕松地可視化并檢測(cè)抗體內(nèi)化隨時(shí)間的變化。

將 HT1080 細(xì)胞用 Incucyte^? Fabfluor-pH 標(biāo)記的 α-CD71 或 IgG1 同型對(duì)照 (4 μg/mL) 進(jìn)行處理，在 12 小時(shí)內(nèi)每 30 分鐘采集一次 HD 相和紅色熒光圖像，所用放大倍數(shù)為 10 倍。經(jīng) Fabfluor-α-CD71 處理的細(xì)胞圖像在細(xì)胞質(zhì)中顯示出紅色熒光 (A)。經(jīng)標(biāo)記的同型對(duì)照處理的細(xì)胞不顯示熒光 (B)。自動(dòng)生成隨時(shí)間推移的紅色對(duì)象區(qū)域，顯示在經(jīng)標(biāo)記的 α-CD71 處理的細(xì)胞中迅速增加，而經(jīng)同型對(duì)照處理后的細(xì)胞中則沒(méi)有信號(hào) (C)。所示圖像在處理后 6 小時(shí)采集得到，顯示的數(shù)據(jù)為 3 個(gè)孔的平均值 ± SEM。

區(qū)分由細(xì)胞表面抗原表達(dá)驅(qū)動(dòng)的多種細(xì)胞類型的內(nèi)化響應(yīng)的差異。

將 Jurkat（T 細(xì)胞樣）和 Raji（B 細(xì)胞樣）細(xì)胞（30,000 個(gè)細(xì)胞/孔）用各種 Incucyte^? Fabfluor-pH 標(biāo)記的抗體 (4 μg/mL) 處理以顯示特定的性質(zhì)。使用 20 倍物鏡在 12 小時(shí)內(nèi)每 30 分鐘采集一次高清相位和紅色熒光圖像。時(shí)程數(shù)據(jù)（A 和 B）表明，兩種細(xì)胞系中的響應(yīng)特征與所測(cè)試的標(biāo)記的預(yù)期表達(dá)譜相匹配，并且證實(shí)內(nèi)化響應(yīng)僅在表達(dá)特定抗原時(shí)才會(huì)出現(xiàn)。請(qǐng)注意，該分析方法可以區(qū)分 Raji 細(xì)胞相比于 Jurkat 細(xì)胞的響應(yīng)差異（α-CD71 的響應(yīng)曲線更陡峭，因此內(nèi)化速率更快）。曲線下面積 (AUC) 分析展示了兩種細(xì)胞系的總體特征 (C)。顯示的所有數(shù)據(jù)均為至少 4 個(gè)孔的平均值 ± SEM，所示時(shí)程數(shù)據(jù)為歸一化的紅色區(qū)域。

揭示濃度依賴性響應(yīng)并進(jìn)行藥理分析。

使用簡(jiǎn)單的即混即讀方案，用濃度不斷增加的 Fabfluor-pH 標(biāo)記的赫賽汀處理 BT-474 Her2 陽(yáng)性細(xì)胞。時(shí)程圖顯示，隨著赫賽汀濃度的增加，歸一化的紅色區(qū)域隨時(shí)間推移不斷增加 (A)；該響應(yīng)的曲線下面積分析表現(xiàn)出明顯的濃度依賴性響應(yīng)，EC50 為 323 ng/mL (B)。顯示的所有數(shù)據(jù)均為 3 個(gè)孔的平均值 ± SEM，所示時(shí)程數(shù)據(jù)為歸一化的紅色區(qū)域。