ATP Assay
The Incucyte? ATP Assay is an end-to-end solution consisting of instrumentation, software, and reagents that enables direct analysis of ATP facilitating the understanding of metabolic change in cancer cells. Evaluate metabolic changes like never before!
使用活細(xì)胞成像和分析研究細(xì)胞代謝
癌細(xì)胞表現(xiàn)出代謝重排，為腫瘤微環(huán)境中增殖率和存活率的提高提供支持。這一現(xiàn)象被視為癌癥的標(biāo)志。最近的研究還指出了解癌細(xì)胞與癌癥相關(guān)基質(zhì)細(xì)胞之間復(fù)雜關(guān)系的重要性，特別是對(duì)于評(píng)估代謝共生如何促進(jìn)耐藥性的重要性。研究人員采用各種生物技術(shù)來(lái)擴(kuò)展其對(duì)癌癥相關(guān)代謝變化的了解并開(kāi)發(fā)抗癌療法。但是，評(píng)估發(fā)生增殖并與環(huán)境相互作用的復(fù)雜癌細(xì)胞模型中的代謝變化受到當(dāng)前技術(shù)的限制。
測(cè)量代謝變化的傳統(tǒng)技術(shù)通常：
- 無(wú)法區(qū)分復(fù)雜共培養(yǎng)模型中細(xì)胞類(lèi)型特異性代謝變化
- 間接測(cè)量代謝副產(chǎn)物，而非直接測(cè)量代謝 ATP 輸出
- 無(wú)法整合細(xì)胞形態(tài)的確認(rèn)
- 分析終點(diǎn)，而不是進(jìn)行動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)
- 無(wú)法結(jié)合生理相關(guān)的環(huán)境條件，因此可能引入誤差
Incucyte? ATP 分析是一種端到端解決方案，由儀器、軟件和試劑組成，能夠直接分析 ATP，有利于了解癌細(xì)胞中的代謝變化。以前所未有的方式評(píng)價(jià)代謝變化！了解更多細(xì)胞代謝分析、細(xì)胞代謝檢測(cè)詳情，歡迎聯(lián)系我們。
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Incucyte? ATP 分析
現(xiàn)在可以通過(guò)直接測(cè)量 ATP 來(lái)區(qū)分先進(jìn)的細(xì)胞模型中的細(xì)胞類(lèi)型特異性、長(zhǎng)期代謝變化
通過(guò)連續(xù)成像和分析，在先進(jìn)的模型中獲得前所未有的細(xì)胞類(lèi)型特異性代謝變化信息。Incucyte? ATP 分析可直接測(cè)量細(xì)胞溶質(zhì)的 ATP，對(duì)生理相關(guān)條件下的腫瘤細(xì)胞模型進(jìn)行表征。使用配備 SX5 代謝光學(xué)模塊、Incucyte? ATP 分析軟件模塊和 Incucyte? CytoATP 慢病毒試劑盒的 Incucyte? SX5 活細(xì)胞分析系統(tǒng)，通過(guò)對(duì)細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行實(shí)時(shí)綜合定性確認(rèn)來(lái)區(qū)分細(xì)胞類(lèi)型特異性 ATP 變化。
關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)
- 新型無(wú)干擾試劑?-?使用 Incucyte? CytoATP 慢病毒試劑盒表達(dá)正在申請(qǐng)專(zhuān)利的基因編碼的熒光 ATP 指示劑 - 與多種細(xì)胞類(lèi)型兼容
- 分析細(xì)胞類(lèi)型特異性 ATP 變化??-?捕獲并分析動(dòng)態(tài)細(xì)胞溶質(zhì)的 ATP 變化，以區(qū)分先進(jìn)的細(xì)胞模型中的細(xì)胞類(lèi)型特異性效應(yīng)
- 對(duì) ATP 進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間研究??-??生成實(shí)時(shí) ATP 測(cè)量值，以便更深入地了解治療的影響 - 無(wú)需連接終點(diǎn)法結(jié)果
- 確認(rèn)細(xì)胞形態(tài)的變化?- 使用每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的 HD 相圖檢查細(xì)胞形態(tài)的變化?
新型無(wú)干擾試劑
Incucyte? CytoATP 慢病毒試劑適用于多種細(xì)胞類(lèi)型，可直接測(cè)量活細(xì)胞中的胞質(zhì) ATP。
圖 1. 對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行高效、無(wú)干擾的標(biāo)記，能夠直接測(cè)量胞質(zhì) ATP。
用 Incucyte? CytoATP 慢病毒感染 HeLa 細(xì)胞并進(jìn)行嘌呤霉素篩選以得到穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞群。與親代細(xì)胞相比，表達(dá) CytoATP 的細(xì)胞的形態(tài) (A) 和增殖 (B) 無(wú)變化。(C) 將穩(wěn)定表達(dá) CytoATP 的 HeLa 細(xì)胞以 4,000 個(gè)細(xì)胞/孔接種到 96 孔微孔板中，并用 2-脫氧-D-葡萄糖 (2DG) 和氰化鉀 (KCN) 進(jìn)行聯(lián)合處理。對(duì) 3 小時(shí)內(nèi)捕獲的 CytoATP 熒光圖像進(jìn)行定量，結(jié)果顯示，由于同時(shí)發(fā)生糖酵解和氧化磷酸化阻斷而導(dǎo)致 ATP 呈濃度依賴(lài)性快速耗竭。
分析細(xì)胞類(lèi)型特異性 ATP 變化
圖 2. 在單一培養(yǎng)或先進(jìn)的細(xì)胞模型中區(qū)在分特定細(xì)胞類(lèi)型中對(duì) ATP 的影響。在存在或不存在 CCD14086SK 成纖維細(xì)胞的條件下，接種三陰性乳腺癌 (TNBC) 細(xì)胞系 HCC1806 和穩(wěn)定表達(dá) CytoATP 或 CytoATP 非結(jié)合對(duì)照的受體陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞系 MCF7（8000 個(gè)細(xì)胞/孔）。使用集成式 Incucyte? ATP 分析軟件模塊鑒別 ATP 的細(xì)胞變化（色標(biāo)遮蔽）。遮蔽后的圖像 (A) 提供了在單一培養(yǎng)物以及與 CCD14086SK 細(xì)胞的共培養(yǎng)物中經(jīng) 1 μM CB-839 處理的 HCC1806 細(xì)胞中 ATP 的可視化。動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)顯示，與單一培養(yǎng)物中生長(zhǎng)的 MCF-7（受體陽(yáng)性細(xì)胞系）(C) 相比，CB-839 處理后 TNBC 細(xì)胞系中 ATP 的耗竭更持久 (B)。然而，與基質(zhì)細(xì)胞的共培養(yǎng)物介導(dǎo)了 TNBC 細(xì)胞中對(duì) CB-839 的抗性，而受體陽(yáng)性細(xì)胞系則未表現(xiàn)出不同的影響。IC50 曲線(xiàn)顯示出時(shí)間點(diǎn) 72 h (B) 和 15 h (C) 的數(shù)據(jù)。
開(kāi)展 ATP 動(dòng)力學(xué)時(shí)間研究
生成實(shí)時(shí)代謝數(shù)據(jù)，以便更深入地了解對(duì)治療產(chǎn)生響應(yīng)的短期和長(zhǎng)期 ATP 動(dòng)力學(xué)。
圖 3. 通過(guò)對(duì) ATP 進(jìn)行無(wú)損、重復(fù)測(cè)量，區(qū)分有絲分裂毒性化合物與細(xì)胞毒性化合物。穩(wěn)定表達(dá) CytoATP 或非結(jié)合對(duì)照的 NIH 3T3 細(xì)胞在標(biāo)準(zhǔn)條件（葡萄糖）或含有替代葡萄糖的半乳糖的生長(zhǎng)培養(yǎng)基（半乳糖）中生長(zhǎng)，以推動(dòng)能量代謝對(duì)氧化磷酸化的依賴(lài)。在 96 孔微孔板中以 12,000 個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種細(xì)胞，并用無(wú)毒化合物（安貝生坦）、細(xì)胞毒性化合物（氯丙嗪）或有絲分裂毒性化合物（奈法唑酮）進(jìn)行處理的熒光圖像（10 倍）。動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)顯示，在經(jīng)細(xì)胞毒性或有絲分裂毒性化合物處理的細(xì)胞中，ATP 迅速耗竭。雖然在兩種培養(yǎng)基條件下對(duì)細(xì)胞毒性化合物的響應(yīng)相似，但是在半乳糖中生長(zhǎng)的細(xì)胞中，奈法唑酮的 IC50 向左偏移，表明存在線(xiàn)粒體毒性。在早期時(shí)間點(diǎn)觀(guān)察到更高的分離度，表明動(dòng)力學(xué) CytoATP 數(shù)據(jù)有助于更深入地評(píng)價(jià)化合物特征。
確認(rèn)細(xì)胞形態(tài)的變化
將細(xì)胞形態(tài)的變化與 ATP 代謝相關(guān)聯(lián)，以揭示細(xì)胞行為的信息、時(shí)間變化。
圖 4. 使用 HD 相圖，能夠?qū)?xì)胞形態(tài)進(jìn)行定性檢查。將穩(wěn)定表達(dá) CytoATP 或非結(jié)合對(duì)照的 HeLa 細(xì)胞以 2000–8000 個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種到 96 孔微孔板中，用氯丙嗪 (60 μM)、依托泊苷 (100 μM) 或 2DG (20 mM) + KCN (2 mM) 進(jìn)行處理，這些化合物耗竭 ATP 且效應(yīng)隨時(shí)間變化，如動(dòng)力學(xué)結(jié)果所突出顯示的（插圖）。在耗竭過(guò)程中采集的細(xì)胞 HD 相圖（10 倍）顯示，與溶媒對(duì)照相比，經(jīng)氯丙嗪 (21 h) 和依托泊苷 (75 h) 處理的細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了巨大變化，而經(jīng) 2DG + KCN (60 min) 處理的細(xì)胞則未表現(xiàn)出顯著的形態(tài)變化。
訂購(gòu)信息
產(chǎn)品 | 說(shuō)明 | 產(chǎn)品目錄號(hào) |
|---|---|---|
| Incucyte? SX5 活細(xì)胞分析系統(tǒng) | 1 臺(tái)儀器 | 4816 |
Incucyte? SX5 代謝光學(xué)模塊 | 1 個(gè)光學(xué)模塊 | 4820 |
Incucyte? ATP 分析軟件模塊 | 1 個(gè)模塊 | 9600-0033 |
Incucyte? CytoATP 慢病毒試劑盒 | 1 盒 | 4772 |
