活細胞免疫細胞化學
使用全新的免疫細胞化學方法揭示表面蛋白表達的動力學機制
免疫細胞化學 (ICC) 是一種重要的細胞成像技術，主要用于蛋白質(zhì)定位、運輸路徑和蛋白質(zhì)間相互作用的可視化。借助專用顯微鏡，研究人員可以實現(xiàn)以納米級的分辨率解析標記細胞的結(jié)構(gòu)。
然而，研究蛋白質(zhì)分布和表達隨時間的變化（可能會在細胞分化、細胞相互作用或?qū)ν獠看碳ぷ鞒龇磻獣r發(fā)生）更具挑戰(zhàn)性。
全新的 Incucyte? 活細胞免疫細胞化學蛋白質(zhì)檢測技術，可利用無干擾的 Incucyte? Fabfluor-488 和 Incucyte? Fabfluor-594 抗體標記染料，補充現(xiàn)有的免疫細胞化學方案，開啟了表面蛋白質(zhì)表達動力學的新視角。
應用
Incucyte? 活細胞免疫細胞化學分析簡介
Incucyte? 活細胞免疫細胞化學分析方案將自動化成像分析的強大功能與簡單易用的抗體標記方法相結(jié)合，可在組織培養(yǎng)箱內(nèi)進行基于圖像的表面蛋白表達動力學測定。
活細胞免疫細胞化學分析為長期跟蹤和定量細胞表面蛋白標記物提供了強大的解決方案，且隨后還可以將標記物與細胞功能和形態(tài)相關聯(lián)，從而更深入地洞察細胞過程。
關鍵優(yōu)勢
Incucyte? 活細胞分析系統(tǒng)聯(lián)合 Incucyte? Fabfluor-488 和 Incucyte? Fabfluor-594 抗體標記染料可提供一套完整的解決方案，可長時間定量分析 96 和 384 孔板中細胞表面蛋白表達和分布的動力學變化，助您更快獲得有意義的結(jié)果。
- 定量表面蛋白表達動力學-?在培養(yǎng)箱中使用無干擾型抗體標記試劑測定蛋白質(zhì)隨時間的表達和分布變化
- 提高分析效率?-?快速、一步標記，同時自動采集和分析多達 6 個 96 孔板的圖像，有助于更快獲得結(jié)果
- 關聯(lián)蛋白質(zhì)表達動力學與形態(tài)和功能-?將表面蛋白質(zhì)的表達變化與細胞功能和形態(tài)相關聯(lián)，揭示細胞行為隨信息和時間的變化
- 通過細胞間的相互作用研究深入洞察結(jié)果??-?在復雜的共培養(yǎng)模型中觀察和定量細胞之間隨時間的相互作用，洞察細胞間的相互影響。
定量表面蛋白表達動力學
測定細胞表面蛋白對炎癥刺激的動態(tài)響應變化，進一步了解腫瘤中免疫細胞信號通路的調(diào)節(jié)。
圖 1. Incucyte? Fabfluor-488 染料熒光的自動分析結(jié)果顯示，PD-L1 的表達隨細胞類型、時間和濃度的增加而增加（右圖）。在含有 Incucyte? Fabfluor-488-α-PD-L1 抗體復合物和 Incucyte? Opti-Green 背景抑制劑的情況下，將帶有 Incucyte? Nuclight 紅色標記 MDA-MB-231（乳腺）或 SKOV-3（卵巢）癌細胞與 IFNγ 共培養(yǎng)。綠色熒光區(qū)域的定量結(jié)果表明，在 IFNγ 的誘導下，MDA-MB-231 細胞中 PD-L1 的表達呈時間和濃度依賴性增加。時程曲線顯示了 MDA-MB-231（高表達）和 SKOV-3（中表達）細胞中 PD-L1 的表達差異。
提高分析效率
快速、一步標記，同時自動采集和分析多達 6 個 96 孔板的圖像，有助于更快獲得結(jié)果。
關聯(lián)蛋白質(zhì)表達動力學與細胞形態(tài)和功能
輕松地將蛋白質(zhì)豐度和分布的長期變化與細胞形態(tài)和功能的實時變化相關聯(lián)。
圖 2. 將細胞表面標志物、吞噬細胞活力和增殖檢測的多重分析和形態(tài)學觀察應用于分化研究（右圖）。在 CD11b、CD14 或 CD40 復合 Incucyte? Fabfluor-488 抗體存在的情況下，將 THP-1 單核細胞暴露于培養(yǎng)基（未分化）、維生素 D3 或 PMA 中。與培養(yǎng)基單獨處理或維生素 D3 處理的細胞相比，PMA 處理后細胞形態(tài)顯示出明顯的變化（高清相差圖片）。動態(tài)圖突出顯示了不同處理條件下，細胞表面蛋白表達的差異性和時間依賴性。有趣的是，在檢測 Incucyte? pHrodo? 紅色細胞標記試劑盒標記的 Jurkat 凋亡細胞的胞葬作用時，PMA 會導致細胞增殖（匯合）減少，同時吞噬能力增加，而培養(yǎng)基或維生素 D3 處理則未出現(xiàn)這種結(jié)果。
通過細胞間的相互作用研究深入洞察結(jié)果
通過細胞表面蛋白表達標記物觀察和定量分析細胞間的相互作用，深入洞察復雜的共培養(yǎng)模型。
圖 3. 使用 Incucyte? Fabfluor-488 抗體標記染料觀察和定量混合培養(yǎng)物中的免疫相互作用。將帶有 Incucyte? Cytolight 紅色標記的 A549 腫瘤細胞與 Incucyte? Fabfluor-488-α-CD45 和 Incucyte? Opti-Green 標記的總淋巴細胞群的預活化或未活化的 PBMC 混合。添加 PBMC 后 2 小時采集的圖像顯示了 CD45+ 細胞（綠色）和 A549 細胞（紅色）之間的相互作用。相互作用的定量分析結(jié)果（疊加，圖像中的黃色 mask）顯示，活化的效應細胞與靶細胞的相互作用明顯增加，表明細胞參與了對腫瘤細胞的免疫殺傷（如柱狀圖所示）。
（視頻）在免疫細胞殺傷模型中，確認細胞間相互作用隨時間的變化。在含有 Incucyte? Fabfluor-488 標記的 CD8 抗體的情況下，將帶有 Incucyte? Nuclight 紅色標記的 A549 肺癌細胞與人 PBMCs 共培養(yǎng)。CD3/IL-2 對 PBMC 的活化提高了 PBMCs?與腫瘤細胞的相互作用。免疫細胞的 Incucyte? Fabfluor-488-CD8 標記證實了細胞極性，其中 PBMC的 CD8+ 區(qū)域看上去與 A549 腫瘤細胞有所接觸。
驗證數(shù)據(jù)
驗證無干擾、特異性的長效標記試劑
Incucyte? Fabfluor-488 染料具有無干擾的特性，可產(chǎn)生長期特異性標記，支持對活細胞進行長達數(shù)小時或數(shù)天的有效表面蛋白動力學分析。
圖 4. 使用 Incucyte? Fabfluor-594 染料，結(jié)合 Incucyte? Surface Fit 背景扣除和 Incucyte? Cell-by-Cell 分析，觀察和定量表面標志物隨時間的表達。在 Incucyte? Fabfluor-594 標記的 α-CD71 存在的情況下培養(yǎng)的 HT-1080 細胞顯示紅色熒光，而使用 Incucyte? Fabfluor-594 IgG 同型對照培養(yǎng)的細胞不顯示細胞熒光。添加 Incucyte? Opti-Green 或 Incucyte? Fabfluor-594 標記抗體在 2 天內(nèi)對細胞生長沒有影響 (A)。只有經(jīng)標記的 CD71 處理后的細胞顯示出紅色對象的面積隨時間而增加 (B)，當針對細胞區(qū)域進行歸一化處理時，結(jié)果顯示 CD71 的表達恒定 (C)。
特異性抗原檢測對混合細胞群進行識別和定量分析
使用可識別蛋白表達隨時間變化的特定表面標記評估復雜的共培養(yǎng)模型，表征細胞間的相互作用。
圖 5. Incucyte? Fabfluor-488 染料顯示出表面標志物表達隨時間變化的特異性和持久性。Ramos（B 細胞樣）細胞在多種 Incucyte? Fabfluor-488 標記抗體和 Incucyte? Opti-Green 存在的環(huán)境下生長。從圖中可以觀察到非特異性 (CD45) 和特異性 (CD20) B 細胞標記物的長期標記。T 細胞標記 (CD3) 或同型對照抗體則未觀察到熒光信號。 當 Ramos 和 Jurkat（T 細胞樣）細胞以固定比例混合時，可檢測到預期水平的 CD20 染色，證明了 CD20 在混合培養(yǎng)中的作用。
訂購信息
訂購信息
產(chǎn)品 | 數(shù)量 | 產(chǎn)品目錄號 |
|---|---|---|
| Incucyte? 小鼠 IgG1 Fabfluor-488 抗體標記試劑盒 | 1 瓶 (50 μg) | 4745 |
| Incucyte? 小鼠 IgG2a Fabfluor-488 抗體標記試劑盒 | 1 瓶 (50 μg) | 4743 |
| Incucyte? 小鼠 IgG2b Fabfluor-488 抗體標記試劑盒 | 1 瓶 (50 μg) | 4744 |
| Incucyte? 小鼠 IgG1 Fabfluor-594 抗體標記染料 | 1 瓶 (50 μg) | 4844 |
Incucyte? 小鼠 IgG2a Fabfluor-594 抗體標記染料 | 1 瓶 (50 μg)? | 4863 |
Incucyte? 小鼠 IgG1 Fabfluor-555 抗體標記試劑盒 | 1 瓶 (50 μg) | BA-04873 |
