概述
中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)的實(shí)時定量分析
中性粒細(xì)胞處于感染部位的第一道防線，在先天免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用，中性粒細(xì)胞可采用多種策略來降解和殺死微生物，其中包括釋放中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng) (NET)。NET 是一種由抗微生物蛋白和 DNA 組成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過一種獨(dú)特的中性粒細(xì)胞程序性死亡形式釋放，該過程稱為 NETosis。NET 是一種宿主防御的策略，捕獲然后降解病原體，但 NET 也與多種自身免疫性疾?。ò愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎）和病理狀態(tài)相關(guān)。
我們的策略
使用 Incucyte? 活細(xì)胞成像系統(tǒng)和 Incucyte? Cytotox 綠色試劑實(shí)時自動定量分析執(zhí)行 NETosis 過程的中性粒細(xì)胞。使用 Incucyte? 活細(xì)胞試劑分析觀察和評估 NETosis 過程中細(xì)胞核的膨脹和解聚階段，以及之后的 NET 釋放過程。
NETosis 分析
Incucyte? NETosis 分析簡介
Incucyte? NETosis 分析可提供一種綜合性解決方案，可在組織培養(yǎng)箱內(nèi)實(shí)時自動觀察和定量分析 NETosis，支持 96 孔規(guī)格。
使用 Incucyte? 活細(xì)胞 NETosis 分析方案進(jìn)行 NETosis 分析。實(shí)時監(jiān)測使用 PMA 處理的人源中性粒細(xì)胞的 NETosis 過程（左邊視頻）。將進(jìn)行 NETosis 的中性粒細(xì)胞用即混即讀的 Incucyte? Cytotox 綠色試劑標(biāo)記為綠色，并使用 Incucyte? 活細(xì)胞分析系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)時定量分析。
關(guān)鍵優(yōu)勢
- 使用延時成像技術(shù)驗(yàn)證 NETosis?-?Incucyte? 活細(xì)胞分析系統(tǒng)可驗(yàn)證與 NETosis 相關(guān)的獨(dú)特形態(tài)變化，實(shí)時跟蹤多葉細(xì)胞核的丟失、核解聚和細(xì)胞膜破壞。
- 使用 Incucyte? Cytotox 綠色試劑在整個分析過程中進(jìn)行自動化分析??-?確定處理效果如何以及何時發(fā)生作用，無需將細(xì)胞從培養(yǎng)箱的穩(wěn)定環(huán)境中取出，非常適合用于敏感細(xì)胞的分析。
- 簡單的即混即讀 96 孔方案，適用于藥理學(xué)篩選;?無需細(xì)胞清洗、固定和分離操作 -?采用即混即讀的 Incucyte? Cytotox 綠色試劑，在細(xì)胞外 DNA 釋放和熒光增強(qiáng)時快速可視化并定量分析 NETosis。
- 聯(lián)合細(xì)胞凋亡的多重分析深入洞察機(jī)制??-將 Incucyte? Annexin V 紅色染料和 Cytotox 綠色試劑相結(jié)合進(jìn)行多重測定，可輕松區(qū)分細(xì)胞凋亡和 NETosis
使用延時成像技術(shù)驗(yàn)證 NETosis
Incucyte? 活細(xì)胞分析系統(tǒng)可驗(yàn)證與 NETosis 相關(guān)的獨(dú)特形態(tài)變化，實(shí)時跟蹤多葉細(xì)胞核的丟失、核解聚和細(xì)胞膜破壞。
使用 Incucyte? 高清圖像驗(yàn)證 NETosis。 在 Incucyte? Cytotox 綠色試劑存在的情況下，使用 PMA 刺激 DMSO (1.25% v/v) 和 ATRA (0.1 μM) 誘導(dǎo)分化的 HL-60 細(xì)胞獲得 Incucyte? 圖像。注意刺激后 2 小時左右會出現(xiàn)細(xì)胞核特征性解聚。隨著細(xì)胞質(zhì)與核質(zhì)的混合，細(xì)胞核在相位圖像中不再可見。細(xì)胞核內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜上并釋放出來，外部 DNA 與 Incucyte? Cytotox 綠色試劑結(jié)合，可觀察到熒光增強(qiáng)（綠色）。
使用 Incucyte? Cytotox 綠色試劑在整個時間進(jìn)程中進(jìn)行自動分析
確定處理效果如何以及何時發(fā)生作用，無需將細(xì)胞從培養(yǎng)箱的穩(wěn)定環(huán)境中取出，非常適合用于敏感細(xì)胞的分析。
自動、非侵入性地定量處理效果。Incucyte? NETosis 分析可對 96 孔板的每個孔進(jìn)行自動成像和分析，提供中性粒細(xì)胞隨時間變化的生理動力學(xué)讀數(shù)（左圖）。使用帶有面積過濾器的集成式 Incucyte? 基礎(chǔ)分析儀軟件（右圖，排除小于 300 μm2 的對象）能夠區(qū)分細(xì)胞凋亡（經(jīng) CMP 處理的較小標(biāo)記細(xì)胞，只有細(xì)胞核因失活而發(fā)出熒光）和 NETosis（經(jīng) PMA 處理，核內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜上并釋放出來，外部 DNA 被標(biāo)記）的誘導(dǎo)處理。
簡單的即混即讀 96 孔板方案，適用于藥理學(xué)篩選；無需細(xì)胞清洗、固定和分離操作
采用即混即讀的 Incucyte? Cytotox 綠色試劑，在細(xì)胞外 DNA 釋放和熒光增強(qiáng)時快速可視化并定量分析 NETosis。
使用 Incucyte? Cytotox 綠色試劑在整個時間進(jìn)程中進(jìn)行自動分析
揭示濃度依賴性響應(yīng)并進(jìn)行藥理分析。使用濃度遞增的 NADPH 氧化酶抑制劑二苯基氯化碘鹽 (DPI) 處理 dHL-60 細(xì)胞， 然后用 PMA 刺激細(xì)胞，并采用簡單的即混即讀方案，通過 Incucyte? Cytotox 綠色試劑標(biāo)記細(xì)胞。時程圖顯示在 100 nM 濃度 PMA 的刺激下，綠色對象的總面積隨時間的推移而增加，并隨著 DPI (A) 濃度的增加而受到抑制；Incucyte? 采集的孔板視圖顯示出清晰的陽性和陰性對照反應(yīng)（H 行），每種抑制劑的處理均表現(xiàn)出濃度依賴性反應(yīng)（每種抑制劑，每種濃度 n = 3）(B)；曲線下面積分析可以清晰地顯示出濃度依賴性反應(yīng) (C)。
聯(lián)合細(xì)胞凋亡的多重分析深入洞察機(jī)制
將 Incucyte? Annexin V 紅色染料和 Incucyte? Cytotox 綠色試劑相結(jié)合進(jìn)行多重測定，可輕松區(qū)分細(xì)胞凋亡和 NETosis
結(jié)合磷脂酰絲氨酸 (PS) 外翻的 NETosis 多重測定。使用 Incucyte? Cytotox 綠色試劑（NETosis - 高熒光，對象區(qū)域大）或 Incucyte? Annexin V 紅色染料（PS 外翻 - 低熒光）標(biāo)記經(jīng) PMA 或離子霉素刺激的細(xì)胞，檢測不同類型的中性粒細(xì)胞死亡。
訂購信息
Incucyte? Cytotox 綠色試劑和 Annexin V 紅色染料經(jīng)過充分驗(yàn)證，可用于 Incucyte? 活細(xì)胞分析系統(tǒng)，并可在同一孔內(nèi)與 NETosis 和細(xì)胞凋亡的聯(lián)合進(jìn)行多重檢測。
產(chǎn)品 | 數(shù)量 | 產(chǎn)品目錄號 |
|---|---|---|
| 用于死亡細(xì)胞計數(shù)的 Incucyte? Cytotox 綠色試劑 | 5 uL x 5 | 4633 |
| 用于細(xì)胞凋亡的 Incucyte? Annexin V 紅色染料 | 100 次檢測 | 4641 |
技術(shù)資源
文獻(xiàn)和文檔
相關(guān)應(yīng)用
使用高通量實(shí)時成像技術(shù)定量 NETosis 以及區(qū)分人中性粒細(xì)胞的細(xì)胞死亡機(jī)制。
使用高通量實(shí)時成像技術(shù)定量 NETosis 以及區(qū)分人中性粒細(xì)胞的細(xì)胞死亡機(jī)制。?Gupta S, Chan DW, Zaal KJ, Kaplan MJ.?J Immunol, 200: 869-879, 2017
“Incucyte? 是創(chuàng)新的實(shí)時分析平臺，能夠以快速、自動化和可重現(xiàn)的方式定量分析 NETosis，大幅優(yōu)化了中性粒細(xì)胞的研究。該平臺是評估中性粒細(xì)胞生理學(xué)和 NETosis，以及快速開發(fā)和測試新型中性粒細(xì)胞靶標(biāo)的強(qiáng)大工具?！?/p>
