高表達(dá)克隆的篩選和分離在抗體生產(chǎn)中的應(yīng)用
在抗體生產(chǎn)中，開發(fā)新細(xì)胞系的一個(gè)基本步驟是鑒定可穩(wěn)定產(chǎn)生高水平靶蛋白的單細(xì)胞衍生克隆。與傳統(tǒng)技術(shù)耗時(shí)耗力的步驟相比，使用 CellCelector 可以更有效地進(jìn)行生產(chǎn)率篩選。
高產(chǎn)克隆的篩選和分離
在通過雜交瘤克隆生成抗體時(shí)，不同克隆之間可能存在巨大差異。由克隆產(chǎn)生并分泌到培養(yǎng)基中的蛋白可以通過熒光標(biāo)記的二抗來顯像。由于半固體培養(yǎng)基的粘度較大，阻止抗體進(jìn)一步擴(kuò)散到培養(yǎng)基中，信號(hào)將在產(chǎn)生抗體的細(xì)胞克隆周圍顯示為熒光暈。CellCelector 軟件通過比較明場視野下可見的細(xì)胞團(tuán)大小和細(xì)胞團(tuán)周圍熒光暈的大小，計(jì)算每個(gè)克隆的抗體生產(chǎn)率，從而選出高產(chǎn)克隆。用戶可以通過該方法對來自多個(gè)培養(yǎng)板的細(xì)胞克隆進(jìn)行排序，以獲得最佳的高產(chǎn)克隆。
雜交瘤克隆（淺藍(lán)色）以及熒光標(biāo)記二抗（綠色帶黃色圓圈）檢測分泌抗體（深藍(lán)色）的示意圖 (A-C)
使用熒光標(biāo)記二抗孵育后的雜交瘤克隆的顯微鏡視圖（明場和熒光的疊加）(D-F)。
抗體產(chǎn)生強(qiáng)度與集落周圍熒光暈的直徑相關(guān)：不產(chǎn)生抗體的克隆團(tuán)（A 和 D）；產(chǎn)生中等量抗體的克隆團(tuán)（B 和 E）；產(chǎn)生大量抗體的克隆團(tuán)，即高產(chǎn)克隆團(tuán)（C 和 F）。克隆團(tuán)大小相似（見 D-F 中的放大區(qū)域，即明場觀察結(jié)果）。
產(chǎn)生抗體的 CHO 細(xì)胞團(tuán)；使用 CellCelector 的半固體培養(yǎng)基模塊進(jìn)行挑取前后的 QC 圖像。
用半固體培養(yǎng)基挑取模塊收集并轉(zhuǎn)移到96孔目標(biāo)板上培養(yǎng)的CHO細(xì)胞團(tuán)（轉(zhuǎn)移后第1天和第5天）。
使用 CellCelector 從甲基纖維素和其他半固體培養(yǎng)基中篩選單克隆的優(yōu)勢
使用一次性挑頭
- 使用一次性塑料挑頭，在每次篩選時(shí)自動(dòng)更換，避免交叉污染和噴嘴堵塞。
- 即用即拋，無需清洗污染的挑頭。
- 多種內(nèi)徑規(guī)格，適用于不同克隆尺寸。
特點(diǎn)
- 從一批檢測板中選出排名靠前的優(yōu)質(zhì)克隆體：首先掃描所有平板，然后逐板挑選。
- 控制低吸入量和速度，防止同時(shí)挑取到相鄰克隆。
- 挑取過程中自動(dòng)驗(yàn)證相鄰克隆的移動(dòng)，確保所有目標(biāo)克隆在抽吸前自動(dòng)重新居中。
- 在臨近挑取前自動(dòng)分析目標(biāo)克隆周圍的區(qū)域，避免了挑到相鄰太近的克隆。
- 用戶可定義的分選和排序策略，例如克隆質(zhì)量、大小或生產(chǎn)率的排序。
高分辨率光學(xué)元件和智能成像系統(tǒng)
- 檢測大克隆附近的小克隆團(tuán)或單細(xì)胞，確保對目標(biāo)克隆進(jìn)行單克隆分離，幫助開發(fā)新細(xì)胞系。
- 可以通過分析集落的結(jié)構(gòu)并定義形態(tài)學(xué)參數(shù)（例如球度和形狀）來排除可疑（例如細(xì)長）的克隆。
- 可通過顯微圖像（挑取前后的圖像）進(jìn)行質(zhì)量控制，并獲取挑取過程中的實(shí)時(shí)圖像。
可定制性和靈活性
- 多達(dá)6 個(gè)熒光通道；可根據(jù)客戶應(yīng)用要求定制其他熒光通道。
- 適用標(biāo)準(zhǔn)以及定制的細(xì)胞源板和轉(zhuǎn)移目標(biāo)板。
- 支持上游和下游自動(dòng)化集成。
- 可整合到FlowBox 孵育箱中進(jìn)行長時(shí)間檢測。
相關(guān)文獻(xiàn)
- Zoldan, K. et al.?Automated clonal selection of ?high-producing hybridoma colonies from methylcellulose-based, semi-solid ?medium using the cell separation robot CellCelectorTM??nature methods application notes (2010) ??
- Caron A.W. et al.?Fluorescent labeling in semi-solid medium for selection of ?mammalian cells secreting high-levels of recombinant proteins (CHO)??BMC Biotechnol. 9: 42 (2009) ??
- Julien, A. et al.?Antigen specific antibody-producing clones selected by isotypes??Biosystems International Application Note ?
- Gilbert, R.?Fluorescent labeling in Semi-Solid Medium to Identify High Expressing Clones for Recombinant Protein Production (CHO)??CHI's Bioprocessing Summit Presentation, Boston 2011