探索單細胞克隆掀起的藥物細胞系開發(fā)新變革
您是否厭倦了在堆積成山的細胞培養(yǎng)板中接種成千上萬個細胞，只是為了辨別這些細胞是否為單細胞、有活力的細胞或者是高產(chǎn)細胞？厭倦了篩選數(shù)百個平板只為了找到一個包含所有目標基因并且滿足您目標產(chǎn)量的克隆？為什么要讓您的藥物細胞系開發(fā)寄希望于奇跡？借助 CellCelector 全自動無損細胞分離系統(tǒng)，您可以快速有效地評估和驗證您的克隆，然后再決定選擇哪一個。只需不到一周的時間，即可從單個細胞池中獲得大批量單克隆、有活力且高產(chǎn)的克隆體。您現(xiàn)在可以根據(jù)實際數(shù)據(jù)來可靠地預測克隆的未來，不必再以平板數(shù)量取勝。這將為您節(jié)省耗材和培養(yǎng)基成本、培養(yǎng)箱空間，但非常重要的是，通過避免錯誤、第二輪克隆和不必要的支出，為達到您的項目目標節(jié)省了寶貴的時間。了解更多單克隆細胞篩選信息，歡迎聯(lián)系我們。
融合了單克隆性證明和活力檢測的單細胞克隆篩選分離工作流程
CellCelector 現(xiàn)在可用于高通量單細胞克隆，從而快速生成藥物生產(chǎn)細胞系。只需進行一輪克隆，同時工作流程中自動生成可靠的圖像驗證單克隆性（HT-NIC：基于納米孔陣列和圖像驗證的高通量克隆技術）。
憑借對克隆的單克隆性和生存能力的綜合快速評估，以及克隆轉(zhuǎn)移到96 或384 孔板后的生長率，CellCelector 單細胞克隆技術代表了下一代單細胞克隆方法?？捎行娲邢尴♂專↙D）、流式細胞分選（FACS）或單細胞打印技術等傳統(tǒng)方法。這種具有專利保護的新方法是與?ProBioGen AG?共同開發(fā)，并得到其他 CellCellector 客戶的一致好評。
CellCelector 納米孔細胞培養(yǎng)板
HT-NIC 方法基于?CellCelector 納米孔板?。 這些培養(yǎng)板具有多種不同的規(guī)格，每個孔底部有數(shù)千個微型的納米孔。在24 孔板中，每個孔有3000 個納米孔，整個納米孔板有72,000 個納米孔。通過納米孔有效地將細胞分隔開來。
盡管進行了局部分離，但納米孔內(nèi)的細胞被同一種培養(yǎng)基所覆蓋，因此出現(xiàn)了有效的細胞共培養(yǎng)。池中的所有細胞將有助于細胞系的生長，同時保持其單克隆性。產(chǎn)品實現(xiàn)了行業(yè)領先的單細胞生長率，即使是極難培養(yǎng)的細胞系。
基于納米孔板的CellCelector單細胞克隆工作流程
細胞鋪板方式與傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)板相似。鋪板后，按照經(jīng)典的泊松分布在每個納米孔內(nèi)隨機捕獲這些細胞。自動掃描孔，然后自動鑒別包含單細胞的所有納米孔，提供了一個可靠的基于圖像的單克隆性證明。 根據(jù)接種的細胞數(shù)量，每孔捕獲400-600個單細胞，可進行分析。接種多個孔可使您從單個納米孔中捕獲約14,000個單細胞?所有這些均在一個納米孔板內(nèi)實現(xiàn)。?
單克隆性被證明后，細胞將在培養(yǎng)箱中生長3至6天，每個克隆可生長20至75個細胞。與傳統(tǒng)的基于甲基纖維素的方法相反，基于CellCelector納米孔板的方法允許克隆在液體介質(zhì)中生長?？寺」蚕硐嗤慕橘|(zhì)，但通過納米孔有效地將它們彼此隔開。當細胞生長為單細胞克隆后，再次掃描納米孔板并自動選擇單克隆性且具有活力的克隆，并將其轉(zhuǎn)移到96或384孔板中進行進一步分析和放大。?
全自動單克隆性證明： 納米孔中可靠的單細胞檢測
在傳統(tǒng)的單細胞克隆工作流程中，單個細胞被鋪到96 孔板中，由于細胞通常位于孔的邊緣，很難在明亮的區(qū)域進行可靠的自動單細胞檢測。因此，通常在克隆生長后的第0 天手動或追溯檢查指定克隆的單克隆狀態(tài)。但是為什么要在一個比單個細胞所占據(jù)的表面大100 倍的孔內(nèi)搜索一個細胞呢？用Cellcelector HT-NIC 方法，細胞被 200 μm的納米孔分離開來并清晰可見，即使在剛剛鋪好板后，或是細胞靠近納米孔邊緣的情況，也可以通過軟件自動且準確地識別。?
告別有限稀釋，CellCelector Flex 提供100% 單克隆性
在有限稀釋法（一種成熟的單細胞克隆方法）中，單克隆性基于統(tǒng)計學特性，其概率取決于根據(jù)泊松分布植入到每個孔中的細胞平均數(shù)量。為了控制單克隆孔的數(shù)量，通常每孔播種不超過0.2 個細胞。此外，僅約16% 的孔為單克隆，而其他孔保持空置。因此，要獲得400 個單細胞孔，需要播種超過25 個96 孔板。若每孔接種0.5 個細胞，可以使單細胞孔的數(shù)量加倍，但代價是非單克隆孔的數(shù)量顯著增加。
CellCelector HT-NIC 克隆方法通過自動鑒別單細胞納米孔， 跟蹤其生長到克隆，并將生長的克隆無交叉污染地轉(zhuǎn)移到96 孔板中，從而提供100% 的單克隆孔，不依賴于樣品制備方法、細胞類型或用于鋪納米孔板的細胞密度。
圖片展示了通過CellCelector HT-NIC 克隆法和有限稀釋法所獲得單克隆孔的概率對比。
使用有限稀釋法獲得400 個單克隆孔，需要使用26 個96 孔板（0.2 個細胞/ 孔接種密度）或13 個96 孔板（0.5 個細胞/ 孔接種密度）。要達到相同數(shù)量的單克隆孔，只需CellCelector 納米孔板的一個大孔就足夠了。
單細胞克隆活率超過90%
有限稀釋法僅能實現(xiàn)10%-20%的生長率。其他傳統(tǒng)方法如FACS單細胞分選或單細胞打印鋪板法可使單細胞在孔內(nèi)接種率大大提高，但通常流式細胞術伴隨高剪切力，并且轉(zhuǎn)移的單細胞存在于大量的培養(yǎng)基中，導致生長率介于30%到64%之間。此外，這些方法需要特定且昂貴的帶有外源生長因子的克隆培養(yǎng)基，并且不適合于難以生長的細胞系，因為這些細胞根本無法從單個細胞中生長。
在CellCelector HT-NIC方法中，所有鋪孔的細胞共享相同的培養(yǎng)基，通過釋放自然生長因子而不損害克隆性，促進彼此的生長。只有在一個克隆被證明是單克隆的并且是高活力的之后，它才會被選中并溫和地轉(zhuǎn)移到96孔板中。因為它現(xiàn)在已經(jīng)是一個可存活的小單克隆團，而不是一個被轉(zhuǎn)移的孤單細胞，它將更容易在轉(zhuǎn)移后的大孔里繼續(xù)生長。
在嚴格控制的無菌環(huán)境中獲取可靠的單細胞克隆
可將 CellCelector 系統(tǒng)置于生物安全柜內(nèi)，從而在無菌條件下進行試驗和克隆轉(zhuǎn)移?？梢圆捎秒S系統(tǒng)一起提供的標準潔凈柜或者定制機柜。為了進一步提高細胞活力和分析穩(wěn)定性，CellCelector也可安裝在細胞孵育箱Flowbox中， 它結合了一個緊湊的層流細胞培養(yǎng)罩，能夠?qū)崿F(xiàn)溫度、濕度和二氧化碳控制，以及紫外燈殺菌等功能。
將 CellCelector 單細胞克隆用于細胞系開發(fā)的優(yōu)勢
簡便易用
- 樣品制備簡單
- 用戶友好型軟件，具有專為單細胞克隆而開發(fā)的功能
- 無需日常維護
出色性能
- 從單個細胞中獲得幾乎100%的克隆
- 一輪克隆即同時提供基于圖像的單克隆性證明和克隆活力評估
- 將克隆轉(zhuǎn)移至 96 孔板后，細胞存活率高達 95%
值得信賴
- 通過高質(zhì)量圖像穩(wěn)定且自動地完成非標記單細胞檢測，并證明單克隆性以向 FDA 提交
- 幾乎100% 選擇性回收克隆，無克隆間污染
- 采用一次性毛細管和納米孔板，避免項目間交叉污染
- 從單細胞到克隆再到轉(zhuǎn)移，實現(xiàn)所有克隆的可追溯性
- 自動化克隆轉(zhuǎn)移質(zhì)量控制（捕獲/失?。?/li>
節(jié)約成本
- 在 6 天內(nèi)獲得經(jīng)證實的有活力單克隆性克隆
- 在耗材、培養(yǎng)基和培養(yǎng)箱存儲空間方面顯著節(jié)約成本
- 24 孔納米孔板的一個孔即可產(chǎn)生 200-500 個靶克隆
- 無需通過額外的成像系統(tǒng)即可完成單克隆評估
靈活性強
- 可兼容多種細胞系（CHO、HEK293；NS0、PER.C6 等）
- 不限制細胞大小
- 可在一個平板內(nèi)運行多達 24 個樣品，易于優(yōu)化細胞密度或培養(yǎng)基
- 可兼容多種應用工作流程（單個 B 細胞篩選、雜交瘤篩選、基因編輯、稀有單細胞分離等）
- 可兼容標準或定制源容器和目標容器，如微孔板、培養(yǎng)皿、載玻片、過濾器、芯片、PCR板或管
