抗體篩選
想要成功進(jìn)行抗體發(fā)現(xiàn)，快速識(shí)別和表征與靶點(diǎn)反應(yīng)的候選分子是關(guān)鍵。本案例研究展示了 iQue?高通量流式細(xì)胞儀在靶細(xì)胞系建立、小鼠血清評(píng)估和雜交瘤細(xì)胞文庫(kù)篩選中的應(yīng)用。
抗體篩選應(yīng)用
快速評(píng)估經(jīng)細(xì)胞表面靶抗原轉(zhuǎn)染的克隆。選擇靶抗原高水平表達(dá)的健康克隆，確保下游雜交瘤細(xì)胞篩選的理想結(jié)果。
提高生產(chǎn)率
400 個(gè)工程細(xì)胞克隆用于高表達(dá)靶抗原的篩選。
在 1 小時(shí)內(nèi)完成 5塊 96 孔板的運(yùn)行和分析。
功能強(qiáng)大的多重篩選分析
基于細(xì)胞的多重分析可在可一步篩選出健康生長(zhǎng)且高表達(dá)表面抗原的細(xì)胞系。
快速方便、可視化的結(jié)果
使用 Profile Map 實(shí)現(xiàn)高水平表達(dá)靶抗原和高細(xì)胞數(shù)量的克隆的可視化。
靶細(xì)胞系建立的篩選結(jié)果可視化
使用 ForeCyt?軟件進(jìn)行篩選結(jié)果的可視化。細(xì)胞經(jīng)慢病毒編碼靶抗原轉(zhuǎn)導(dǎo)后，在選定的壓力下培養(yǎng)，并分類(lèi)保存至 96 孔板中。待細(xì)胞生長(zhǎng)后，將等份細(xì)胞轉(zhuǎn)移到檢測(cè)板上，在 iQue?高通量流式細(xì)胞儀上使用該抗原的特異性熒光標(biāo)記抗體檢測(cè)表面抗原的表達(dá)，同時(shí)測(cè)定細(xì)胞數(shù)量，作為細(xì)胞生長(zhǎng)的指標(biāo)。
Profile Map 顯示，含有大量細(xì)胞的加樣孔中，細(xì)胞表面靶抗原高水平表達(dá)。
孔板視圖顯示了細(xì)胞表面靶抗原表達(dá)水平的詳細(xì)信息。疊加未轉(zhuǎn)染的對(duì)照細(xì)胞表達(dá)的數(shù)據(jù)可直觀顯示陽(yáng)性克隆。
需進(jìn)行大規(guī)?；诩?xì)胞的實(shí)驗(yàn)，以識(shí)別產(chǎn)生高水平靶抗原特異性抗體的免疫小鼠。同時(shí)檢測(cè)幾十只免疫小鼠的血清可提高產(chǎn)生最佳抗體反應(yīng)性雜交瘤細(xì)胞的成功率。
提高生產(chǎn)率
對(duì) 36 只免疫小鼠的血清進(jìn)行細(xì)胞表面靶抗原結(jié)合檢測(cè)。
將免疫前和免疫后的小鼠血清稀釋 8 倍，進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。
功能強(qiáng)大的多重篩選分析
基于細(xì)胞多重分析可一步篩選出與靶抗原結(jié)合（而不結(jié)合其他抗原）的血清。
快速方便、可視化的結(jié)果
使用熱圖可視化處理含有結(jié)合靶抗原（而不結(jié)合其他抗原）的高滴度抗體的小鼠血清。
小鼠血清評(píng)估篩選結(jié)果的可視化
使用 ForeCyt?中的 HeatMap 功能將檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行可視化處理。采用細(xì)胞熒光編碼染料將 3 個(gè)細(xì)胞系進(jìn)行染色編碼，混合后轉(zhuǎn)移至 384 孔板中。將血清樣品加入到每個(gè)孔中，然后采用熒光檢測(cè)抗體，通過(guò) iQue? 高通量流式細(xì)胞儀對(duì)孔板進(jìn)行分析。對(duì) 36 只小鼠免疫前和免疫后的血清進(jìn)行 8 倍稀釋?zhuān)缓筮M(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。
HeatMap 顯示了抗體與對(duì)照細(xì)胞、表達(dá)靶抗原的細(xì)胞和表達(dá)不相關(guān)抗原的細(xì)胞結(jié)合的結(jié)果。
一種高通量的多重篩選，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)靶抗原（對(duì)照抗原除外）的結(jié)合檢測(cè)。整個(gè)篩選和數(shù)據(jù)分析過(guò)程可在一天內(nèi)完成。
提高產(chǎn)率
從 2 只不同的免疫小鼠中篩選出 9600 個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆。
可在 1 天內(nèi)完成 25 × 384 孔板的運(yùn)行和分析。
功能強(qiáng)大的多重篩選分析
基于細(xì)胞多重分析可一步篩選出與靶抗原結(jié)合（而不結(jié)合其他抗原）的抗體。
快速方便、可視化的結(jié)果
28800 個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)可立即組合和處理到結(jié)合指標(biāo)中。
可觀察到 53 個(gè)與靶抗原（而非對(duì)照抗原）結(jié)合的結(jié)果。
雜交瘤細(xì)胞文庫(kù)篩選結(jié)果的可視化
使用 ForeCyt?中的 Panorama 功能將整個(gè)篩選結(jié)果進(jìn)行可視化處理。采用熒光細(xì)胞編碼器染料將 3 個(gè)細(xì)胞系進(jìn)行熒光編碼，混合后加樣至 384 孔板的孔中。在每個(gè)加樣孔中加入雜交瘤細(xì)胞上清液，然后進(jìn)行抗體熒光檢測(cè)。使用靶抗原表達(dá)細(xì)胞檢測(cè)從 2 只不同的免疫小鼠的 9600 個(gè)雜交瘤克隆。整個(gè)篩選過(guò)程可在一天內(nèi)完成。
HeatMap（紅色）顯示了抗體與對(duì)照細(xì)胞、表達(dá)靶抗原的細(xì)胞和表達(dá)有聯(lián)系但不相關(guān)抗原的細(xì)胞結(jié)合的結(jié)果。
Profile Map（藍(lán)色）將結(jié)合結(jié)果與三種類(lèi)型細(xì)胞進(jìn)行合并，顯示了與靶抗原表達(dá)細(xì)胞結(jié)合的抗體，但與不相關(guān)抗原表達(dá)或陰性對(duì)照細(xì)胞不結(jié)合的抗體。
抗體篩選資源
推薦資源
iQue?高通量流式細(xì)胞儀優(yōu)勢(shì)
使用 ForeCyt ?軟件的 Profile Map 功能篩選具有所需特征的抗體克隆。
