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利用實時活細胞分析了解 B 淋巴細胞的特異性免疫

B 淋巴細胞

B 細胞在特異性免疫系統(tǒng)中發(fā)揮中心作用,負責產(chǎn)生針對入侵性病原體的抗原特異性免疫球蛋白。B 細胞的激活和增殖對抗體分泌至關(guān)重要,但持續(xù)性刺激也會導(dǎo)致 B 細胞白血病和淋巴瘤細胞的存活和生長,如霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。

Incucyte?實時活細胞分析系統(tǒng)已被用于評估 B 細胞的關(guān)鍵功能,包括細胞活化和聚集,抗體內(nèi)化,以及通過細胞凋亡評估 B 細胞腫瘤的細胞凋亡,和免疫細胞殺傷實驗。


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了解免疫學(xué)

活化和聚集

非貼壁B 細胞系的增殖。通過相差圖像對 WIL-2NS 細胞(一種 B 細胞系)的增殖進行定量。 與預(yù)期一致,起始匯合度由接種密度決定。 通過向每個加樣孔中接種已知數(shù)量的細胞,等待沉降后進行定量分析,完成匯合度測量的驗證。然后,對細胞進行滲透處理,測定三磷酸腺苷 (ATP) 的含量,提供二次讀數(shù)。研究發(fā)現(xiàn),匯合度和細胞數(shù)量或 ATP 測定之間存在很強的相關(guān)性。

細胞凋亡(Annexin V 綠色染料)

檢測 B 細胞在細胞毒性實驗后的凋亡情況。在 Incucyte? Annexin V 綠色染料的存在下,獲取 WIL2-NS B 淋巴瘤細胞經(jīng)溶劑或喜樹堿 (1 μM) 處理 24 小時后的代表性圖像。時間進程曲線顯示,Incucyte?? Annexin V 綠色染料發(fā)出的綠色熒光增加,表明喜樹堿誘導(dǎo)的細胞膜表面磷脂酰絲氨酸呈時間和濃度依賴性增加。

免疫細胞殺傷

測定白血病細胞的抗體依賴性細胞毒作用 (antibody dependent cellular cytotoxicity, ADCC)。存在免疫細胞時(未處理,或存在 IL-2 (10 ng/mL) 和 IL-12 (10 ng/mL) 或美羅華 (Rituxan) (15 ng/mL - 100 μg/mL)),表達 NucLight?紅色核標記物的 Ramos B 淋巴細胞的相位和熒光融合圖像??筛鶕?jù)紅色熒光強度的損失來定量細胞毒性。

定量抗體內(nèi)化

臨床上使用的抗體美羅華 (Rituxan) 的內(nèi)化。使用 Incucyte? FabFluor 標記的美羅華(10 ng/mL 至 10 μg/mL)處理 Raji 細胞(B 細胞樣)(30, 000個/孔)。使用 20 倍物鏡在 12 小時內(nèi)每 30 分鐘采集一次高清相位和紅色熒光圖像。所有數(shù)據(jù)顯示為至少 4 孔的平均值 ± SEM,時間進程數(shù)據(jù)顯示為歸一化的紅色區(qū)域(紅色區(qū)域/相位區(qū)域)。

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