使用 Incucyte^? 測定腫瘤球中的 ADCC效應。免疫細胞存在時（未處理條件下，或存在抗-CD3 （10 ng/mL）?和 IL-2 （10 ng/mL）?或赫賽汀 （0.08 ng/mL - 50 μg）），SKOV-3 Incucyte^? NucLight 紅色腫瘤球的相位和熒光融合圖像。可根據(jù)紅色熒光強度來定量細胞毒性。圖中數(shù)據(jù)顯示了激活的 T 細胞群和赫賽汀誘導的細胞毒性對腫瘤球產(chǎn)生的破壞作用。

自然殺傷細胞介導的抗體依賴性細胞毒性作用，可誘導濃度依賴性靶細胞的死亡和顆粒酶的產(chǎn)生。

編碼的 Raji 腫瘤細胞 (2×10⁴個/孔) 與來自兩個單獨供體的 PBMC (2×10⁵個/孔) 共培養(yǎng)。PBMC 分別與以下三個抗CD20 抗體之一共同孵育：Ab-1 (IgG1)、Ab-2 (IgG1) 或陰性對照 Ab-3 (IgA2)。濃度范圍在 10 μg/mL - 0.128 ng/mL 之間。

4 小時后，使用人 NK 細胞殺傷分析試劑盒和 iQue^? 3 分析 10 μL 樣品，以評估腫瘤細胞殺傷情況，同時還使用 iQue^? 人 NK 細胞配套試劑盒測定了顆粒酶 A。(A,B) 來自兩個供體的靶細胞殺傷對抗體的響應不同。(C,D) 兩個供體細胞顆粒酶 A 的產(chǎn)生都呈現(xiàn)出濃度和供體依賴性。(E,F) NK 細胞上 CD16 的檢出量隨抗-CD20 抗體濃度的增加而降低。這可能是由 CD16 的脫落或 CD20 抗體的競爭導致。

細胞因子刺激增強了 NK 細胞介導的腫瘤細胞直接殺傷作用。將編碼的 K562 腫瘤細胞 (2×10⁴個/孔) 與富集的（陰性選擇）人 NK 細胞共培養(yǎng)，人 NK 細胞已在單獨培養(yǎng)基（非活化 NK 細胞），或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15（已活化 NK 細胞）的培養(yǎng)基中孵育 16-18 小時，效靶比為 1:1 或 5:1。在 4 小時和 24 小時后，使用 iQue^? 人 NK 細胞殺傷分析試劑盒和 iQue^? 3 對 10 μL 樣品進行分析，以評估腫瘤細胞的殺傷作用。(A) 直方圖顯示了靶細胞在與非活化或細胞因子激活的 NK 細胞共培養(yǎng) 4 小時后的活性。(B,C) 圖中匯總了在與非活化或細胞因子激活的 NK 細胞共培養(yǎng) (B) 4 小時或 (C) 24 小時后死亡腫瘤細胞的百分比。

靶細胞的存在會誘導 NK 細胞的活化，并通過細胞因子刺激進一步增強。將編碼的 K562 腫瘤細胞 (2×10⁴個/孔) 與富集的（陰性選擇）人 NK 細胞共培養(yǎng)，人 NK 細胞已在單獨培養(yǎng)基（非活化 NK 細胞），或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15（已活化 NK 細胞）的培養(yǎng)基中孵育 16-18 小時，效靶比為 5:1。在共培養(yǎng) 24 小時后，取出 10 μL 樣品，使用 iQue^? 人 NK 細胞殺傷分析試劑盒和 iQue^? 3 進行分析。(A) 活化標志物（CD69 和 CD25）的表達情況。(B) IFNg 的產(chǎn)生和顆粒酶 B 的分泌情況。(C) 將 iQue^? 人 NK 細胞配套試劑盒和 iQue^? 人 NK 細胞殺傷分析試劑盒相結(jié)合，對其他額外的細胞因子進行平行評估。 ?NK = 自然殺傷細胞。T = K562 腫瘤靶細胞。

IL-2 和 IL-15 活化后，多種效應蛋白（如顆粒酶 B 和 CCL5 (RANTES)）的表達和分泌增加。這些作用在靶細胞和 NK 細胞共培養(yǎng)時進一步增強。