圖 1. 在 SH-SY5Y 成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞模型中，mTOR 抑制劑 PP242 可影響細(xì)胞健康。將 SH-SY5Y 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞接種到 96 孔板中（5,000 個(gè)細(xì)胞/孔），在含 Incucyte^? Annexin V NIR (0.5%; artorius) 的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 3 天后，用 mTOR 抑制劑 PP242 (50-0.21 μM) 處理。使用 Incucyte^?實(shí)時(shí)活細(xì)胞分析系統(tǒng)實(shí)時(shí)獲取相位和熒光圖像。典型圖片顯示了用 PP242 (16.7 μM) 和溶劑分別處理 72 小時(shí)后的比較結(jié)果。時(shí)間進(jìn)程和藥物反應(yīng)曲線顯示，細(xì)胞匯合度呈濃度依賴性下降，細(xì)胞死亡相應(yīng)增加 (pIC50 4.8)。數(shù)據(jù)表示為平均值 ± SEM（3 次重復(fù)測(cè)定）。

圖 2. 實(shí)體腦腫瘤 3D 腫瘤球生長(zhǎng)速度和面積的形態(tài)學(xué)差異。將成神經(jīng)細(xì)胞瘤 (SH-SY5Y) 和成膠質(zhì)細(xì)胞瘤 (U87-MG) 細(xì)胞分別接種到 96 孔圓底孔板中（5,000 細(xì)胞/孔），然后等待細(xì)胞形成單腫瘤球（3 天）。在 Incucyte^?中監(jiān)檢測(cè)腫瘤球的形成和生長(zhǎng) 10 天。圖 (A) 中顯示了腫瘤球形成 7 天后的代表性的明場(chǎng)圖像和分割 mask（藍(lán)色輪廓）。圖 (B) 中顯示了腫瘤球形成后的時(shí)間進(jìn)程曲線圖，表明兩種細(xì)胞腫瘤球的生長(zhǎng)速度和面積有所不同，SH-SY5Y 的面積略大于 U87，面積分別為 6.6 × 105 μm2 和 5.0 × 105 μm2。圖 (C) 中顯示了量化后的單球體偏心率，結(jié)果表明：U87 腫瘤球一經(jīng)形成，即呈現(xiàn)圓球狀、緊湊且保持低偏心率（第 1 天為 0.33，第 7 天為 0.31），而 SH-SY5Y 腫瘤球偏心率較高（第 1 天為 0.55，第 7 天為 0.78），隨著時(shí)間的推移，細(xì)胞增殖，腫瘤球的密實(shí)程度有所下降。數(shù)據(jù)表示為平均值 ± SEM（12 次重復(fù)測(cè)定）。

圖 3. 人源成膠質(zhì)細(xì)胞瘤 U87 單球模型的驗(yàn)證和穩(wěn)定性。(A) 將穩(wěn)定表達(dá) Incucyte^? Nuclight-Orange 的 U87-MG 細(xì)胞以不同的密度（1,000-7,500 細(xì)胞/孔）接種到 96 孔板中，并在 Incucyte^? 中監(jiān)測(cè)其形成情況 3 天。(B) 使用橙色熒光數(shù)值觀察到接種的高度穩(wěn)定性和球體區(qū)域的密度依賴性差異。數(shù)據(jù)表示為平均值 ± SEM，并顯示 CV% 值。(C) 細(xì)胞接種并形成單球體后的明場(chǎng)和橙色熒光圖像（7,500 細(xì)胞/孔，3 天），并使用橙色分割 mask（紅色輪廓）。

圖 4.化療化合物在細(xì)胞抑制和細(xì)胞毒性作用方面的差異。將成膠質(zhì)細(xì)胞瘤 (U87-MG) 細(xì)胞接種到 96 孔圓底孔板（5,000 細(xì)胞/孔）中，等待細(xì)胞形成腫瘤球（3 天），在 Incucyte^? 中監(jiān)測(cè) 10 天。(A) 腫瘤球形成后，在Incucyte^? Annexin V NIR ?存在的情況下，使用 DNA 抑制劑 Cisplatin (0.82 - 200 μM) 或雙重 mTOR 抑制劑 PP242 (0.21 - 50 μM) 處理細(xì)胞。(B) 時(shí)間進(jìn)程曲線顯示了在明場(chǎng)區(qū)域中，腫瘤球在 Cisplatin (200 μM) 和 PP242 (50 μM) 的最高濃度下，相較溶劑空白組的變化。(C) 時(shí)間進(jìn)程數(shù)據(jù)和藥物反應(yīng)曲線表明，PP242 具有很強(qiáng)的細(xì)胞抑制作用，但只有在較高濃度下才會(huì)發(fā)生細(xì)胞凋亡，而 Cisplatin 則表現(xiàn)出較高的細(xì)胞毒性。數(shù)據(jù)表示為平均值 ± SEM。

圖 5. 高通量研究化合物對(duì)成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤球侵襲的影響。將 U87-MG 細(xì)胞接種到 ?96 孔圓底板中（2,500 細(xì)胞/孔），等待其形成腫瘤球（3 天）。然后用一系列稀釋的抗轉(zhuǎn)移化合物處理腫瘤球，并將其埋入 Matrigel (4.5 mg/mL) 以誘導(dǎo)侵襲（長(zhǎng)達(dá) 10 天）。(A) Incucyte^?微孔板圖中顯示了3天處理后對(duì)腫瘤球侵襲的結(jié)果（整個(gè)腫瘤球區(qū)域；黃色輪廓 mask）。(B) 細(xì)胞松弛素 D (2.34 nM - 300 nM) 和 PP242 (0.01 μM - 30 μM) 對(duì) U87-MG 腫瘤球侵襲的抑制呈濃度依賴性，而 Blebbistatin (0.01 μ M - 30 μ M) 對(duì) U87-MG 腫瘤球侵襲的抑制作用不大。